配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类 、不同的外植体 、不同的培养阶段应当有所不同 。一般来说 ，各种培养基都有大量元素、微量元素 、维生素 、激素、糖和琼脂等物质 ，有时还要在培养基里添加有机附加物，如活性炭 、香蕉汁 、椰子汁等 。在生产上 ，首先选用已有的培养基配方 ，它是前人研究的成果，又是经过生产实践验证的。现在几乎各种花卉用的营养基配方都有 ，可以免去您再研究的麻烦 ，当然在生产实践中，也可适当改进 。如果您找不到合适的配方 ，可先试用MS培养基 ，MS是Murashige和Skoog的缩写，他们二人于1962年研究出来了这种培养基 。下面以MS培养基为例，介绍怎样配制。
（1）配制母液 。把培养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1 000倍称量后制成一种浓溶液 ，这种浓溶液叫母液 。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。母液配好后贴上标签 ，放在0～4℃的冰箱中，可使用半年到1年 ，这样做可节省许多时间 。可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的 ，不能放在同一个容器中 。配制母液要用重蒸馏水。药物要使用分析纯或等级较高的化学纯。药物的称量和药液的定容都要准确 。母液①：硫酸镁18.5克，硝酸铵82.5克 ，硝酸钾95.0克 。加水定容到1000毫升 ，浓度为培养基的50倍，配1升培养基时量取20毫升母液。母液②：氯化钙22.0克 。加水定容到500毫升 ，浓度为培养基的100倍 ，配1升培养基时量取10毫升母液 。母液③：磷酸二氢钾8.5克。加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍 ，配1升培养基时量取10毫升母液 。母液④：乙二胺四乙酸二钠3.73克 ，硫酸亚铁2.78克 。加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。母液⑤：硼酸620毫克 ，硫酸锰2230毫克 ，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克 ，碘化钾83毫克 ，钼酸钠25毫克，氯化钴2.5毫克 。加水定容到1000毫升 ，浓度为培养基的100倍 ，配1升培养基时量取10毫升母液 。母液⑥：肌醇5克，甘氨酸100毫克 ，烟酸25毫克 ，盐酸吡哆醇25毫克，盐酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升 ，浓度为培养基的100倍 ，配1升培养基时量取10毫升母液 。
（2）配制培养基 。配制每1000毫升培养基，称取6～10克琼脂作凝固剂，具体按配方要求称量 ，放在水浴锅上慢慢溶解。先在量筒内放入一定量的水 ，按照母液顺序和规定量，量取母液。当母液加完后 ，根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等 ，细胞分裂素类0.04～10毫克，细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤 ，加完后倒入已熔化的琼脂中 。每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定 ，定容到所需的体积 。继续加温，直到琼脂完全熔解。用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节 ，多数培养基的pH在5.4～6.0之间 ，MS培养基的pH为5.7 。将配好的培养基趁热倒入培养容器中，培养基占容器体积的1/3～1/4 。不要将培养基沾到容器壁上 ，否则容易被杂菌感染。然后及时加盖 ，进行高压灭菌，灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用 。在121℃ 、压力111千帕下维持15～20分钟，温度和时间都要严格控制 。到时间后立即切断电源 ，当高压锅内压力降到常压后 ，开启放气阀，打开锅盖 ，取出灭菌好的培养基 ，放在接种室中培养3天，没被感染后才能用来组织培养。
培养基的配制过程如下：
1 、配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分 ，按照培养基的配方 ，称取各种原料，依次加入使其溶解 ，最后补足所需水分 。对蛋白胨、肉膏等物质 ，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分 ，应在全部原料溶解后加水补足 。
配制固体培养基时 ，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌 ，以免琼脂糊底烧焦 。
2、调节pH值?
用pH试纸（或pH电位计 、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值 ，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节 ，直到调节到配方要求的pH值为止 。
3 、过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时 ，最好折叠成六层，用滤纸过滤时 ，可将滤纸折叠成瓦棱形 ，铺在漏斗上过滤。
4 、分装
已过滤的培养基应进行分装 。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中 。如果要制作平板培养基或液体 、半固体培养基 ，则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时 ，一手捏松弹簧夹，使培养基流出 ，另一只手握住几支试管或锥形瓶 ，依次接取培养基 。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染 。
装入试管的培养基量 ，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时 ，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度） ，如制作深层培养基 ，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升 。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜 。
5、加棉塞?
分装完毕后 ，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气 ，避免污染 。棉塞应采用普通新鲜 、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉 ，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用 。
制作棉塞时 ，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块 ，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中 ，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后 ，应迅速塞入管口或瓶口中 ，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入 。棉塞不要过紧过松 ，塞好后 ，以手提棉塞 、管、瓶不下落为合适 。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札 ，准备灭菌。
6 、制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后 ，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行 。
(1)制作斜面培养基 。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条 ，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上 ，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基 。
(2)制作平板培养基 。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上 ，点燃酒精灯 ，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧 ，左手打开培养皿盖 ，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升 ，以铺满皿底为度。
铺放培养基后放置15分钟左右 ，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠 ，倒置过来 ，平放在恒温箱里，24小时后检查 ，如培养基未长杂菌 ，即可用来培养微生物 。
本文来自作者[admin]投稿，不代表易币号立场，如若转载，请注明出处：https://blog.shanxihuayang.com/yibi/7852.html
评论列表（3条）
我是易币号的签约作者“admin”
本文概览：配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类、不同的外植体、不同的培养阶段应当有所不同。一般来说，各种培养基都有大量元素、微量元素、维生素、激素、糖和琼脂等物...
文章不错《怎样配制母液和培养基？》内容很有帮助